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EpiQuik

发布时间:2018/7/3      点击次数:3507

 

 

美国Epigentek集团公司是先进的表观遗传学相关研究的技术创新者和产品开发供应商。公司开发了700多个产品,为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。相比普通方法的产品而言,这些*的产品在科研分析过程中更简单、更快捷、更方便、更有效。*的备受推崇的学者、先进的制药企业以及先进的生物技术公司都在使用Epigentek产品。让客户满意和帮助客户在试验中取得成功是我们进行技术创新的首要任务。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

EpiQuik™羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)bob星空体育的示意图程序。

EpiQuik Hydroxymethylated DNA Immunoprecipitation (hMeDIP) Kit

用于基于抗体的羟甲基化DNA段的捕获,用于微阵列,PCR或NGS应用

 

货号

规格

P-1038-24

24 reactions

P-1038-48

48 reactions

P-1038-96

96 reactions

 

Input Type:

DNA

Research Area:

DNA Methylation

Target Application:

Immunoprecipitation

Vessel Format:

96-Well Plate

 Guarantee:

6 months

 

EpiQuik™羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)bob星空体育  是完整的一套优化的缓冲液和试剂以进行成功的hMeDIP程序的DNA段使用DNA在高通量形式含有5-羟甲基(5- HMC)选择性富集分离来自任何物种。富含该bob星空体育的羟甲基化DNA可用于各种下游应用,包括PCR(hMeDIP-PCR)和微阵列(hMeDIP-芯片),用于研究细胞或组织中的基因特异性羟甲基化。

关于5-羟甲
基胞嘧啶5-hmC是近  在动物组织中发现的胞嘧啶的修饰形式  ,并且在调节DNA甲基化,染色质重塑和基因表达方面发挥重要且不同于5-mC的作用,特别是在脑特异性基因中。规。近,观察到5-hmC与哺乳动物受精卵中的表观遗传重编程相关。然而,5-hmC的确切功能尚未*确定,因为5-hmC的基因特异性分布未知,因为目前使用的DNA甲基化分析方法无法区分5-hmC和5-mC。

产品特征
由于DNA中存在5-hmC,基因调控功能不明确,并且由于发现产生5-hmC的酶,因此鉴定特定基因位点的羟甲基化状态至关重要,这有助于更好地理解甲基化基因功能的表观遗传调控。为实现这一目标,Epigentek开发了一种创新方法来捕获含有5-hmC的DNA段,并将此方法整合到其™羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)bob星空体育中。该bob星空体育使用高亲和力5-hmC抗体选择性捕获含有5-hmC的双链或单链DNA段。该套件具有以下功能:

  • 极快且方便的方案,总程序时间(从输入样品到即用型羟甲基化DNA)不到3小时,包括短的处理时间少于20分钟。
  • 灵活的96 stripwell微孔板格式使测定非常容易处理:一次一个反应的手动方法或一次96个反应的高通量方法。
  • 富集阳性/阴性对照> 1000。
  • 低DNA输入要求每次反应低至0.1μg。
  • 通过预先优化的hMeDIP条件实现高重复性。
  • 兼容各种下游分析工作流程,包括hMeDIP-PCR和hMeDIP芯片。

原则和程序
™羟甲基化DNA免疫沉淀(hMeDIP)bob星空体育包含使用从哺乳动物细胞或组织中分离的DNA进行成功hMeDIP程序所需的所有试剂。该bob星空体育包括阳性对照DNA段,阴性对照非免疫IgG和对照引物,其可与阳性对照一起使用以证明用bob星空体育试剂和方案对羟甲基化DNA的富集功效。含有5-hmC的阳性对照DNA可以通过5-hmC抗体免疫沉淀,但不能通过非免疫IgG进行免疫沉淀。在该hMeDIP中,在优化的反应条件下在微量培养板中处理富含5-hmC的DNA段的免疫沉淀,这使得hMeDIP能够在3小时内完成。然后清洗,释放和洗脱免疫沉淀的羟甲基化DNA。

简单,快速,灵活
整个hMeDIP程序具有易于遵循的简便步骤,从DNA剪切到hMeDNA洗脱可在3小时内完成。96 stripwell微孔板格式允许手动处理,一次进行1次反应或通过一次进行96次反应进行高通量处理。bob星空体育中包含羟甲基化的DNA段和非免疫IgG,分别作为阳性对照和阴性对照,用于从任何物种(包括哺乳动物,植物,真菌,细菌和病毒类型)富集羟甲基化DNA。

选择性和高浓度
*的方法和专有的bob星空体育组合物允许从基因组DNA样品中选择性和高度富集羟甲基化DNA用于基因特异性羟甲基化分析。将实时PCR与该bob星空体育组合,检测到OCT4启动子区域中的5-hmC富集比GAPDH启动子区域中的高5倍(参见图2),表明OCT4启动子是羟甲基化的。对甲基胞嘧啶和未甲基化的胞嘧啶没有交叉反应性,因此仅富含羟甲基化的DNA(5-hmC)(参见图3)。

与MeDIP兼容
™hMeDIPbob星空体育可与MeDIP程序一起使用,用于同时分析特定基因位点的羟甲基化和甲基化状态。

响应性,可靠性和实用性
基于其工作原理和微孔板形式,该bob星空体育可以高通量方式使用来自各种形式的DNA,包括培养细胞,新鲜和冷冻组织,石蜡包埋组织,血液样本和体液样本。为了证明该bob星空体育的功能,它已成功用于从人脑组织中分离的基因组DNA中捕获羟甲基化DNA部分。用该bob星空体育富集的人脑中羟甲基化DNA的百分含量(0.80%)与用 TM羟甲基化DNA定量bob星空体育  (0.67%)测量的  相当,表明用hMeDIPbob星空体育*捕获羟甲基化DNA部分。

 

™hMeDIP

供应商1的hMeDIP

供应商2的hMeDIP

工作准则

免疫捕获

免疫捕获

免疫捕获

工作格式

微孔板为主

珠为主

珠为主

每次运行的大反应次数

96

10

16

高吞吐量

是

没有

没有

便利(分析步骤)

12个步骤

20个步骤

28个步骤

总程序时间

<3个小时

~24小时

~24小时

物理处理时间

<15分钟

> 1小时

> 1小时

输入DNA的量

0.1-1μgss/ dsDNA

0.1-1μgss/ dsDNA

1.2μgss/ dsDNA

使用加标5-hmC对照折叠富集

> 1000

> 1000

> 1000

用来自细胞/组织的基因组DNA样品折叠富集

> 100

N / A

N / A

来自基因组DNA样品的富集hmeDNA的产量

每500 ng人脑DNA约4 ng

N / A

N / A

特异性(正/负比率)

> 99%

> 99%

> 99%

每次反应成本

$ 10

$ 35

$ 47

产品组件

 

Wash Buffer 
Antibody Buffer 
hMeDIP Solution 
DNA释放缓冲液
非免疫IgG(0.6 mg / ml)
5-hmC抗体(0.6 mg / ml)
对照DNA(500 ng / ml)
蛋白酶K(10 mg / ml)
Control Primer-Forward( 20μM)
对照引物 - 反向(20μM)
8孔分析条(带框架)
粘合剂8孔条带薄膜
用户指南

产品引用

 

Fernandez AF 等。人。(2018年6月)。5hmC的丢失确定了胶质瘤中新型的异常DNA高甲基化。 Hum Mol Genet。

Duraisamy AJ 等。人。(2017年12月)。组蛋白与DNA甲基化在糖尿病视网膜基质金属蛋白酶-9调节中的相互作用。 Invest Ophthalmol Vis Sci。 58(14):6440-6448。

Rea M et。人。(2017年11月)。通过iAs选择性抑制CTCF结合指导TET介导的iAs转化细胞中5-羟甲基化模式的重编程。 毒应用药理学。 338:124-133。

魏鹤等 人。(2017年1月)。氧化应激和DNA羟甲基化在细颗粒物神经毒性中的作用。 毒理学。

Kowluru RA 等。人。(2016年7月)。基质金属蛋白酶-9动态DNA甲基化在糖尿病视网膜病变中的作用。 实验室投资。

Celarain N et。人。(2016年4月)。TREM2上调与阿尔茨海默病海马中的5-羟甲基胞嘧啶富集相关。 临床表观遗传学。 8:37。

徐X 等。人。(2015年3月)。异常Rasal1启动子甲基化和羟甲基化的表观遗传平衡调节心脏纤维化。 Cardiovasc Res。 105(3):279-91。

Tampe B 等。人。(2014年12月)。低剂量Hy诱导Tet3依赖的表观遗传重构。 EBioMedicine。 1(1)

Bellizzi D 等。人。(2013年12月)。线粒体DNA的对照区域显示出不寻常的CpG和非CpG甲基化模式。 DNA Res。 20(6):537-47。

Hatem K. Abbas et。人。 检测siRNA指导的DNA甲基化和基因沉默响应盐度应激 伊拉克学术科学期刊。 16(2):89-110。

Cat. 货号#

Antibody Panel Pack

Modifications

Sizes Each

C10000

 Histone H3 Methylation Antibody Panel Pack I- Active Genes

 H3K4me2

H3K4me3

H3K36me2

H3K36me3

 

25 µg

C10001

 Histone H3 Methylation Antibody Panel Pack I - Repression Genes

 H3K9me2

H3K9me3

H3K27me2

H3K27me3

 

25 µg

C10002

 Histone H3 Methylation Antibody Panel Pack II - Active Genes

 H3K4me3

H3K36me3

H3K79me3

 

 

25 µg

C10003

 Histone H3 Methylation Antibody Panel Pack II - Repression Genes

 H3R2me2a

H3R2me2s

H3R8me2a

H3R8me2s

 

25 µg

C10004

 Histone H3 Methylation Antibody Panel Pack III - Active Genes

 H3R17me2a 

H3R17me2s 

H3R26me2a 

H3R26me2s

 

25 µg

C10005

 Histone H3K4 Methylation Antibody Panel Pack

 H3K4me1

H3K4me2

H3K4me3

 

 

25 µg

C10006

 Histone H3K9 Methylation Antibody Panel Pack

 H3K9me1

H3K9me2

H3K9me3

 

 

25 µg

C10007

 Histone H3K27 Methylation Antibody Panel Pack

 H3K27me1