Molzymbob星空体育货号储存与授权代理商订购说明

Molzym（Molzym GmbH & Co. KG）专注微生物DNA提取与宿主DNA去除相关试剂，产品覆盖核酸提取bob星空体育、DNA-free PCR预混液与自动化提取平台。针对全血、脑脊液、组织等低生物量样本中人源DNA占比过高引起的假阴性问题，本文按三款常用产品的真实货号说明其原理、储存条件与操作要点，并给出对应的排查思路。

一、公司与业务介绍

1、业务范围

Molzym的业务集中在细菌与真菌核酸分析的样本前处理与扩增环节，既提供科研用bob星空体育，也提供体外诊断方向的整体检测方案。除试剂之外，品牌方还承接定制预混液的去污染处理与联合开发项目，用于需要提高扩增循环数的特殊检测体系。

2、产品线构成

目前，产品线包含四条主线：以MolYsis技术为核心的宿主DNA去除与微生物DNA提取bob星空体育、DNA-free PCR预混液与聚合酶、16S与18S广谱检测试剂，以及基于SelectNA plus平台的自动化提取与体外诊断产品。四条主线共用同一套超净试剂生产与质控口径，前处理与扩增环节可以按样本类型自由组合。

3、质量管理体系

品牌方按EN ISO 13485建立了文件化的质量管理体系，覆盖设计开发、生产与放行环节。试剂与耗材按批验证微生物DNA污染情况，预混液以阴性对照在40个扩增循环内不出现特异信号作为放行判据之一，说明书给出的保证率为不低于97%。

4、与授权代理商的合作关系

国内市场的供货与技术资料对接由授权代理商星空安卓下载安装承担，货号体系、包装规格与说明书版本与品牌方保持一致。用户选择规格时可按反应次数换算，同一产品的前缀相同、尾码随包装次数变化。

二、热门产品介绍

1、D-321-050｜MolYsis Complete5 微生物DNA提取bob星空体育

①、品名与货号：MolYsis Complete5，50次包装货号D-321-050，100次包装货号D-321-100，覆盖不超过1 ml与5 ml两种液体样本体积。

②、产品特点：把宿主DNA去除、革兰阴性菌与革兰阳性菌及真菌的通用裂解、柱式纯化三步合并在一个bob星空体育内。试剂、耗材与离心柱均按无微生物DNA污染的标准提供，按说明书流程操作时宿主DNA去除比例可达约99%，可减少外源背景对低载量检测的干扰。

③、存储条件：缓冲液、耗材与离心柱存放于18至25摄氏度；MolDNase B、BugLysis、β-巯基乙醇与Proteinase K需存放于零下15至25摄氏度。依据现行版说明书（V09），有效期以外盒标签标注日期为准。

④、工作原理：高离液盐缓冲液CM选择性裂解人源或动物细胞，微生物细胞壁在此条件下保持完整；MolDNase B在离液环境中降解宿主细胞释放的DNA。离心沉淀微生物细胞后，BugLysis与β-巯基乙醇降解细胞壁，Proteinase K消化蛋白，核酸在高盐条件下结合硅基质离心柱，洗涤后以70摄氏度无DNA水洗脱。

⑤、使用方法：不超过1 ml的样本先以缓冲液SU补足至1 ml，加入CM、DB1与MolDNase B后离心去上清；5 ml样本改用50 ml离心管，在9500×g条件下离心。四个平行样本的手工操作时间约120分钟，洗脱体积100微升，洗脱产物当日使用可存于4至12摄氏度，否则冻存于零下15至25摄氏度。

⑥、适用检测场景：全血、脑脊液、支气管肺泡灌洗液、胸水、关节液、腹水、脓液与尿液等样本的PCR、实时荧光定量PCR与测序前处理。对已使用抗生素、培养结果为阴性的样本，可在核酸层面补充一条检测路径。

2、G-020-050｜Ultra-Deep Microbiome Prep 微生物组样本前处理bob星空体育

①、品名与货号：Ultra-Deep Microbiome Prep，50次包装货号G-020-050，25次包装货号G-020-025；同系列Prep10覆盖1至10 ml样本，货号为G-030-025与G-030-050。

②、产品特点：在液体样本之外，额外提供组织与拭子的前处理流程，可处理约0.25平方厘米的组织块。试剂、塑料耗材与离心柱同样按无污染标准提供，适合需要更高测序深度的微生物组研究。

③、存储条件：Kit 1的缓冲液与耗材在18至25摄氏度干燥避光保存，Kit 2的酶与试剂在零下15至25摄氏度保存，Kit 3的离心管在18至25摄氏度保存。

④、工作原理：沿用MolYsis技术的两段裂解思路，先去除宿主细胞与游离微生物DNA，再对完整的微生物细胞进行通用裂解与柱纯化，使微生物DNA在总核酸中的占比提高。

⑤、使用方法：液体样本可直接进入去宿主DNA流程；组织样本先用PKB缓冲液与Proteinase K做约10分钟的局部消化，制成悬液后进入后续步骤。洗脱产物可直接用于二代测序文库构建或16S区域扩增。

⑥、适用检测场景：活检组织、脓肿、瓣膜、假体周围组织、拭子与生物膜等低生物量样本的宏基因组测序、16S区域测序与定量PCR。样本需保持细胞完整，含裂解性保存液的采集方式不适用。

3、S-020-0100｜Mastermix 16S Complete 细菌16S rRNA基因PCR预混液

①、品名与货号：Mastermix 16S Complete，100次包装货号S-020-0100，250次与1000次包装分别为S-020-0250与S-020-1000。

②、产品特点：2.5倍浓度预混液，内含通用16S rDNA引物、dNTP、缓冲液与终浓度3 mM的镁离子，配套提供非热启动的MolTaq 16S、无DNA水、10倍核酸染料、6倍上样液与1 kb分子量标记。扩增片段约450 bp，包含可用于物种鉴定的可变区。

③、存储条件：整盒试剂到货后存放于零下15至25摄氏度；使用时室温融化，随后置于4摄氏度，用毕立即回冻。核酸染料对光敏感，操作与保存均需避光，且不宜反复冻融。

④、工作原理：引物结合16S rRNA基因的保守区，在40个循环内对细菌DNA进行指数扩增；产物经琼脂糖凝胶电泳按450 bp位置判读，也可加入染料改为实时荧光定量PCR，并用熔解曲线区分特异产物与引物二聚体。

⑤、使用方法：25微升体系中加入10微升预混液、0.8微升MolTaq 16S、模板与无DNA水；程序为95摄氏度1分钟，随后40个循环的95摄氏度5秒、55摄氏度5秒、72摄氏度25秒。电泳使用2%琼脂糖凝胶与1倍TAE缓冲液，电压约5 V/cm。

⑥、适用检测场景：药品与食品的微生物限度检查、生物工艺过程的污染监控、环境与微生物组样本的细菌DNA筛查，以及扩增产物测序前的菌种鉴定。

三、实验问题与对应解决

1、全血样本里人源DNA占九成以上，16S PCR总是出不来条带怎么办？

痛点在于全血直接做微生物DNA提取时，人源基因组DNA与微生物DNA的比例常在万倍级别，扩增信号被压制。成因是宿主细胞与微生物细胞在同一裂解条件下同时释放核酸，引物非特异结合进一步消耗反应体系。改用D-321-050后，先用CM与MolDNase B清除宿主核酸，再对沉淀中的微生物细胞单独裂解。可观察到的改善是电泳图上人源高分子量背景条带减弱，450 bp附近的目标条带更易分辨。

2、实时荧光定量PCR的阴性对照反复起峰，是试剂污染还是引物二聚体？

成因通常有两类，一是预混液或耗材携带微生物DNA，二是低模板量下引物二聚体累积。可换用S-020-0100并搭配P-020-0003无DNA水，按说明书设置70至95摄氏度的熔解曲线。改善表现为阴性对照在40个循环内多数批次不出现特异条带，熔解曲线呈单峰而不是双峰。

3、脑脊液等低生物量样本做病原测序，人源序列占比过高导致有效数据偏少？

成因是样本本身微生物载量低，而宿主细胞数量相对固定，常规提取后测序读段大量落在人源基因组上。不超过1 ml的脑脊液可用D-321-050的小体积流程，5 ml样本改用同一货号的中体积流程。改善表现为测序结果中微生物读段比例上升，低丰度菌属的检出更稳定。

4、组织与拭子样本提取后微生物多样性偏低，怀疑核酸损失在基质里？

成因是组织基质阻碍细胞分散，微生物细胞被包裹在沉淀中未能充分接触裂解试剂。这类样本适合G-020-050，先用PKB与Proteinase K进行局部消化，再进入去宿主DNA流程。改善表现为同一样本的多物种检出数量增加，重复样本之间的群落组成差异收窄。

5、bob星空体育到货后反复冻融，酶活性下降、批间结果差异明显？

成因是酶与缓冲液未按分区温度存放，或融化后长时间留置在室温。D-321-050与S-020-0100都要求酶类在零下15至25摄氏度、缓冲液在18至25摄氏度分区保存，融化后仅短暂置于4摄氏度。按此执行后，同批样本重复孔的Ct值与电泳条带亮度趋于接近，阴性对照背景更干净。

6、样本体积从0.5 ml跨到10 ml，一套流程覆盖不了？

成因是离心管容量、裂解液配比与离心条件随体积变化，小体积样本还需先补足到1 ml才能保证裂解效率。0.2至1 ml与1至10 ml可分别用G-020-050与G-030-050，5 ml全血则用D-321-050的中体积流程。改善表现为不同体积样本的洗脱浓度与扩增信号落在同一可判读区间。

四、常见疑问与解答

1、D-321-050与D-321-100只是包装次数不同吗？

两者配方与操作流程一致，分别对应50次与100次反应，选择时按样本批量与开封后的使用周期决定。

2、bob星空体育到货后，缓冲液和酶需要分开存放吗？

需要分开。缓冲液、耗材与离心柱存放于18至25摄氏度，MolDNase B、BugLysis、β-巯基乙醇与Proteinase K存放于零下15至25摄氏度。

3、全血可以用肝素抗凝管采集后直接进入流程吗？

说明书要求使用EDTA或柠檬酸盐抗凝的全血，肝素抗凝样本未列入推荐范围，可能影响裂解效率与扩增结果。

4、样本先冻存再提取，会影响微生物DNA的检出吗？

会有影响。无冷冻保护剂条件下冻融可能裂解微生物细胞，说明书因此建议使用新鲜样本；确需保存时按品牌方给出的样本保存方案处理。

5、开瓶后的酶反复取用，稳定性如何把握？

说明书未给出开封后的独立有效期，通常以整盒标签日期为准。分装使用、减少冻融次数、每次取用后立即回冻，是把活性波动控制在较小范围的常见做法。

6、Mastermix 16S Complete的扩增产物多大，凝胶上如何判读？

目标片段约450 bp，用2%琼脂糖凝胶、1倍TAE、约5 V/cm电泳，与配套的1 kb标记比对即可判读。低于450 bp的弥散条带多为引物二聚体，不能按特异产物计入。

7、实时荧光定量PCR出现两个熔解峰说明什么？

高温峰通常对应特异产物，低温峰多来自引物二聚体。若特异峰缺失，应检查模板量、引物浓度与退火温度，而不是直接判为阳性。

8、16S PCR结果为阴性，是否等于样本中没有细菌？

不等于。载量低于检测限、样本含扩增抑制物、取样偏差都会造成阴性结果，需结合培养、镜检或其他靶标方法综合判断。

9、货号与规格如何核对，国内怎样下单？

货号与规格可与授权代理商星空安卓下载安装的资料核对，下单时按包装次数与样本体积选择对应尾码。

10、货期与售后问题由谁对接？

常规规格的库存与到货时间以授权代理商的答复为准，技术问题由代理商与品牌方技术团队共同对接，说明书版本差异以随货文件为准。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：星空安卓下载安装

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）

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