Kementec TMB显色底物选型及ELISA应用要点

 一、Kementec 的免疫分析试剂业务与产品线

Kementec（Kementec Solutions A/S，以下简称 Kementec）是一家面向免疫分析提供关键试剂的制造商，业务覆盖方法早期开发、试产放大到量产供应。其 TMB 显色底物在 ELISA HRP 底物体系中承担把酶促反应转换为可读光信号的角色。当阴性孔发蓝、显色过快顶到读数上限、换批后标准曲线偏移时，先分辨问题出在底物型号还是流程条件，通常比整条流程重做更省时间。

产品线由四个板块构成。底物板块包括可溶性 HRP 底物（TMB 系列）、可溶性 AP 底物（pNPP）与沉淀型底物；缓冲液与稳定剂板块包括封闭液、HRP 与 AP 偶联物稳定剂、样本稀释液；此外还有 HRP、链霉亲和素等标记物与偶联物，以及重组牛血清白蛋白等蛋白与封闭剂。各板块均以即用型液体为主，可按应用需求做配方定制与批量供应。

质量管理体系按 ISO 9001:2015 运行，环境管理按 ISO 14001:2015 执行，产品放行随附 CoA 与 SDS，关键指标可追溯到批号。以 TMB PLUS2 为例，连续 50 个批次的活性数据落在 ±20% 区间内，这一区间是评估批间波动的直接依据。

配方层面执行 ECO-TEK 原则：不含牛血清白蛋白，不含 NMP 等有机溶剂，不使用毒性防腐剂，终止液浓度降到 0.2 M 硫酸。这一组合减少了有机废液的产生量，也降低了操作与处置环节的风险。

中国区域的产品供应由授权代理商承接。星空安卓下载安装为 Kementec 在中国区域的授权代理商，负责订购对接、随批质量文件提供与售后受理，技术问题可经该渠道回到品牌方技术支持序列。

 二、TMB 显色底物的货号、原理与用法

目前，在售的即用型 TMB 底物以 TMB ONE、TMB PLUS2、TMB EASE 三条线为主，货号分别为 4380、4395、5320，规格覆盖 100 mL、500 mL、1 L 与 bulk。三者共用同一显色化学，差别集中在活性强度与背景水平，选型时按信号幅度需求与样本基质背景两个维度定位即可。

 2.1 4380｜TMB ONE

品名与货号：TMB ONE，货号 4380；同配方另有预染色版本，货号 4430。

产品特点：即用型水性配方，显色产物在 650 nm 处吸收明显，信号幅度高于 OPD 体系，活性稳定，适合对信号强度有要求的检测体系。预染色版本带粉色指示，用于加样过程的可视化追溯。

存储条件：2-8 ℃ 避光保存，未开封货架期 4 年；短期可常温避光放置。需避开光照、受热，以及金属离子和过氧化物酶污染，分装建议使用棕色高密度聚乙烯瓶。

工作原理：HRP 氧化 TMB，生成蓝色可溶产物；加入 0.2 M 硫酸终止后转为黄色，吸收峰移至 450 nm，可在 450/620 nm 双波长读数。

使用方法：按需取量，避光恢复至室温后使用；每孔加 100 µL，避光显色 5-30 分钟。动力学模式直接读 650 nm，终点模式加等体积 0.2 M 硫酸后读数，黄色产物在 1 小时内保持稳定。底物不建议自行稀释，确需降低活性时应配套 TMB ONE Diluent（货号 4470）。

适用检测场景：夹心与竞争 ELISA 的常规比色检测、化学发光前的条件摸索、以及采用电化学检测的传感器体系。缓冲液与稀释液配套齐全，便于在同一体系内做信号强度梯度验证。

 2.2 4395｜TMB PLUS2

品名与货号：TMB PLUS2，货号 4395；预染色版本货号 4445。

产品特点：中等活性、低背景，是阴性孔信号偏高时优先考虑的型号。水性配方不含有机溶剂，批间差异小，显色曲线较平缓，便于在两小时内完成整板读数。

存储条件：2-8 ℃ 避光，未开封货架期 4 年；即用型无需配制，开瓶后按低温避光条件管理。

工作原理：与 4380 相同，HRP 氧化 TMB 生成蓝色产物，经酸终止转为黄色，在 450 nm 测定吸光度。

使用方法：每孔 100 µL，避光显色 5-30 分钟；终止液同为 0.2 M 硫酸，加量与底物等体积。读数窗口与 4380 一致，方法迁移时只需按背景水平重新设定显色时间。

适用检测场景：血清、血浆等基质背景较高的样本、低丰度指标的夹心 ELISA、预包被板的配套显色。需要兼顾背景与信号时，这一型号常与 4380 在同板上做对照。

 2.3 5320｜TMB EASE

品名与货号：TMB EASE，货号 5320。

产品特点：按 2 mg OPD 片剂的灵敏度设计，可作 1:1 替代；显色速度较缓，高浓度样本不容易一次冲到读数上限。水性体系不含有机溶剂，符合 REACH 附件 XVII 对受限物质的限制要求。

存储条件：2-8 ℃ 避光，未开封货架期 4 年；常规包装为 100 mL、500 mL、1 L，另有 bulk 规格。

工作原理：同样由 HRP 氧化 TMB，蓝色中间产物经酸终止转为黄色，在 450 nm 读数，反应路径与 4380、4395 一致。

使用方法：每孔 100 µL，避光显色 20-30 分钟，加 0.2 M 硫酸终止后读数。由 OPD 比色法迁移时，可按原 OPD 加样体积直接对换，再依据信号强度微调显色时间。

适用检测场景：原 OPD 比色法的方法迁移、需要控制上限的定性筛查、手工或半自动读板的常规 ELISA。对显色速度敏感、样本浓度跨度较大的检测，这一型号的时间窗口更宽。

 三、六个常见实验问题的成因与对应货号

 3.1 ELISA 背景偏高、阴性孔也显蓝色怎么办

成因：封闭不充分、偶联物工作浓度偏高，或底物活性高于体系所需。对应型号为 4395 TMB PLUS2。可观察的改善是同一板上阴性孔吸光度下降，阳性孔与阴性孔的差值拉开，低浓度点的区分度随之改善。

 3.2 显色很快但吸光度顶到读数上限怎么办

成因：底物活性与酶标物浓度叠加，显色时间偏长，产物在酶标仪上饱和。对应型号为 5320 TMB EASE；若沿用 4380，可缩短显色时间或提高偶联物稀释倍数。改善表现为高浓度样本的吸光度回到线性区间，复孔差异缩小。

 3.3 换批后标准曲线整体偏移怎么办

成因：底物批间活性差异被放大到整条曲线。处理方式是核对新批 CoA 与批号，按 CoA 标定的活性做曲线校正，4380 与 4395 均适用。TMB PLUS2 连续 50 批数据落在 ±20% 区间，可作为判断偏移是否属于正常波动的参照。

 3.4 终止后复读吸光度一次比一次低怎么办

成因：终止产物在强酸条件下继续缓慢褪色。三款底物均以 0.2 M 硫酸终止，终止稳定性在 60 分钟内降幅不超过 5%。改善方式是把复读安排在终止后 1 小时内完成，前后两次读数的差异随之收敛。

 3.5 实验室限制有机溶剂、废液处置成本高怎么办

成因：传统 TMB 依赖 NMP 等有机溶剂助溶，废液需按有机废液单独归集。ECO-TEK 系列改为 100% 水性配方，可对应这一约束。改善表现为有机废液产生量下降，终止液用量同步减少。

 3.6 手工加样怕漏加或加到相邻孔怎么办

成因：即用型底物本身无色透明，加样痕迹不可见，96 孔板在弱光环境下尤难辨识。对应预染色版本 4430（TMB ONE）与 4445（TMB PLUS2）。粉色指示使加样位置可追溯，终止后颜色消失，不影响 450 nm 读数。

 四、TMB 底物常见疑问解答

问：Kementec TMB 显色底物的货号怎么对应？

答：TMB ONE 为 4380、其预染色版本为 4430；TMB PLUS2 为 4395、其预染色版本为 4445；TMB EASE 为 5320。包装规格与随附文件以现行版说明书与 CoA 为准。

问：底物应该放 4 ℃ 还是 -20 ℃ 保存？

答：说明书标注 2-8 ℃ 避光保存，未要求冷冻。冷冻与反复冻融不在标注条件之内，长期存放按 2-8 ℃ 避光执行即可。

问：运输途中经历常温会影响活性吗？

答：CoA 将短期常温避光列为允许条件，长期存放仍需 2-8 ℃ 避光。到货后按标注条件入库，避免在强光与热源附近停留。

问：开瓶后还能用多久？

答：4 年货架期针对未开封、2-8 ℃ 避光条件。开瓶后没有单独的开封有效期数据，建议低温避光、避免吸头直接接触底物造成污染，并在同一批内尽快用完。

问：每孔加多少、显色多久？

答：常规为 100 µL/孔；4380 与 4395 显色 5-30 分钟，5320 为 20-30 分钟，全程避光孵育。

问：显色过深或过浅如何调整？

答：优先调整显色时间与偶联物稀释度。确需降低底物活性时使用配套稀释液，不要用水或普通缓冲液直接稀释，以免改变反应体系。

问：为什么终止液用 0.2 M 硫酸？

答：该浓度可在 60 分钟内把信号降幅控制在 5% 以内，同时降低酸液危害与废液处理强度，与 ECO-TEK 的配方思路一致。

问：预染色底物的粉色会影响结果判读吗？

答：粉色指示在加入终止液后消失，不参与 450 nm 读数，对结果无干扰。

问：中国区域如何订购，货期与售后怎么安排？

答：中国区域授权代理商为星空安卓下载安装，常规规格与 bulk 包装均可对接。库存与货期以下单时确认为准，CoA、SDS 随批提供，质量相关问题由代理渠道受理。

更多产品信息，请联系中国区域代理商：星空安卓下载安装

（注：本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，具体以品牌信息文档为准。）